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多重熒光免疫組化檢測

更新時間:2025-04-11

簡要描述:

多重熒光免疫的主要技術原理源自酪酰胺信號放大(TSA)技術。TSA是一種利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。該技術利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應,在抗原-抗體結合部位產生大量的酶促產物。這些產物與周圍的蛋白殘基結合,進而與熒光基團結合,使得檢測信號得到幾何級放大。這種技術可與高性能染料如Alexa Fluor、傳統熒光染料等相兼容,實現多重熒光標記。

  多重熒光免疫組化檢測的主要技術原理源自酪酰胺信號放大(TSA)技術。TSA是一種利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。該技術利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應,在抗原-抗體結合部位產生大量的酶促產物。這些產物與周圍的蛋白殘基結合,進而與熒光基團結合,使得檢測信號得到幾何級放大。這種技術可與高性能染料如Alexa Fluor、傳統熒光染料等相兼容,實現多重熒光標記。

  多重熒光免疫組化技術廣泛應用于多個領域:

  單細胞分析:能夠在單個細胞水平上同時檢測多種蛋白質的表達。

  芯片分析:在生物芯片上實現高通量的多重蛋白質檢測。

  組織形態和功能分析:研究組織中不同蛋白質的空間分布和相互關系。

  腫瘤微環境分析:全景式地分析腫瘤免疫浸潤、免疫檢查點、腫瘤細胞與免疫細胞的空間關系等。

  自身免疫疾病分析:探究自身免疫疾病的發病機制和病程進展。

  排異反應評估:監測和評估后的免疫排異反應。

  多重熒光免疫組化檢測的大致步驟如下:

  取樣:獲取待檢測的組織樣本,通常采用切片方法。

  固定處理:用甲醛或乙醇等物質對組織樣本進行固定,以保持其形態結構。

  切片處理:將固定后的組織切成薄片,通常厚度為4-5微米。

  抗體標記:選擇特定的抗體對目標蛋白質進行標記,這些抗體通常與熒光素或酶等物質結合。

  TSA放大:利用TSA技術進行信號放大,使熒光素在抗原-抗體結合部位大量沉積。

  染色處理:通過熒光染色方法將標記的抗體與特定的組織細胞結合。

  圖像采集與分析:使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡采集圖像,并進行定量和定性分析。

  多重熒光免疫組化的圖像分析方法包括:

  定性分析:通過觀察熒光信號的分布和強度,判斷目標蛋白質在組織中的表達和定位。

  定量分析:利用圖像處理軟件對熒光信號進行量化,比較不同樣本或不同條件下的蛋白質表達差異。

  共定位分析:分析不同熒光信號之間的空間關系,探究蛋白質之間的相互作用和共定位情況。

  通過這些分析方法,多重熒光免疫組化檢測技術能夠提供豐富的生物學信息,有助于深入理解細胞的生理和病理過程。


 

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